检查骨髓的原因当检测到外周血异常时，可进行骨髓评估。最常见的适应症是持续性中性粒细胞减少、不明原因的血小板减少、再生不良性贫血或其组合。可进行骨髓检查的增殖异常的例子包括持续性血小板增多症或白细胞增多症、血细胞形态异常或血液中存在无法解释的未成熟细胞（例如缺乏多染红细胞但存在有核红细胞或缺乏炎症但存在中性粒细胞核左移）。有时做骨髓检查是为了进行肿瘤分期（淋巴瘤和肥大细胞肿瘤），或者评估体内铁储备；评估溶骨性病变；以及当动物有不明原因发热、无法解释的体重减轻和无法解释的疾病时寻找潜在疾病。骨髓检查也可用于确定高蛋白血症的原因，例如当其继发于多发性骨髓瘤、淋巴瘤、利什曼原虫病和全身性真菌病时。当动物因为淋巴样肿瘤、多发性骨髓瘤或骨转移瘤出现高钙血症，骨髓检查也可能帮助揭露原因。兽医中，骨髓抽吸比针芯活检更常做。与针芯活检相比，骨髓抽吸更容易、快速、便宜。骨髓针芯活检需要特殊的活检针，切下一条固体核心样本，然后将其放入固定剂，进行脱钙、包埋、切片、染色并由病理学家进行显微镜检查。与抽吸涂片相比，针芯活检切片能更准确地评估骨髓细胞含量以及肿瘤转移，但细胞形态更难评估。骨髓抽吸和针芯活检只有少数禁忌症。保定、镇静和麻醉（使用时）通常比活检操作本身风险更大。患有止血倾向的动物在活检后也可能会出血，但很少发生。对具有单克隆性高球蛋白血症的动物进行活检后可能会发生出血，但通过缝合皮肤切口并在活检部位上施加压力可以很容易地控制出血。活检后感染也是潜在的并发症，但如果操作正确，则极不可能发生。骨髓抽吸和针芯活检的主要禁忌症是不需要时进行（例如再生性贫血或已知败血症导致的中性粒细胞减少）。骨髓活检部位年轻动物的大部分骨骼中都充满活跃的（红色）骨髓。随着成年期的到来，活跃的骨髓会从长骨中退缩，因为随着动物的成长，骨髓空间的扩张速度快于血液的扩张速度。一旦动物停止生长，就必须维持血细胞数量，但不再需要增加产量来适应生长。随着造血细胞的消失，骨髓空间被脂肪（*骨髓）替代，处于静止状态。如果需要，造血细胞可扩张回长骨中，例如贫血时可能会发生。活跃的骨髓保留在成年动物的扁平骨（椎骨，胸骨，肋骨和骨盆）以及肱骨和股骨的近端。髂骨髂嵴通常用作犬骨髓抽吸/活检的部位，有时也用于猫。活检针从髂嵴的最大隆起处进入，平行于髂骨翼的长轴进针（图8-1）。也可以在髂骨翼的中央凹陷处抽吸骨髓，位于髂嵴的后腹侧。图8-1髂嵴和股骨近端骨髓活检的部位FromGrindemCB.Bonemarrowbiopsyandevaluation.VetClinNAmSmallAnimPract.:19:-,asmodifiedfromHarveyJW.Bonemarrowaspirationbiopsy.NAVCClinician’sBrief.;February:44-47.股骨近端对于小体型猫和玩具犬品种，他们的髂骨特别薄，可通过股骨转子窝从股骨近端头部抽吸骨髓（见图8-1）。这个部位是不适合针芯活检。肱骨近端从肱骨近端的前侧抽吸骨髓也常在小动物中进行，特别是肥胖的动物。触诊较大的结节，并在结节远端肱骨近端的前外侧平坦区域进针（图8-2）。图8-2肱骨近端的骨髓活检部位。FromGrindemCB.Bonemarrowbiopsyandevaluation.VetClinNAmSmallAnimPract.:19:-,asmodifiedfromHarveyJW.Bonemarrowaspirationbiopsy.NAVCClinician’sBrief.;February:44-47.胸骨在大型犬中，可以抽吸/活检第三、第四或第五个胸骨。从胸骨采集骨髓有不小心穿透胸壁损伤胸内结构的风险。应使用短活检针（最好外面有可调节的防护装置），并应注意针停留在胸骨中央，尽量减少气胸、不受控制的出血或心脏撕裂的风险。通过触诊肋骨与胸骨的关节来找到胸骨。肋骨近端肋骨近端（背侧）被用于大型动物的骨髓抽吸，尽管成年动物中活检针很难穿透骨头，并且可能会严重破坏活检针。活检肋骨时，也有气胸或不受控制的出血的风险。其他部位如果通过诊断影像检查发现某部位有病变，则可在这些部位进行骨髓抽吸/活检。进行这些操作是为了确定病变的性质，而不是评估造血功能。骨髓抽吸技术用于抽吸骨髓的针必须有可取出的管芯针，管芯针应保持在针管内，直到进入骨髓腔，以防止针管被皮质骨阻塞。长度在1到1.5英寸之间的16或18G针（Rosenthal,Illinoissternal,orJamshidi）就很好（图8-3）。图8-3骨髓抽吸针。Illinois伊利诺斯18G的骨髓抽吸针，带有管芯针和可调节的护罩，以限制穿透深度。骨髓抽吸细胞学作为诊断辅助工具的有用性取决于正确采集骨髓样本和高质量骨髓涂片。在大多数情况下，对于犬和大动物，抽吸仅需要局部麻醉。但是经常使用镇静，尤其是那些反抗人工保定的动物。猫骨髓抽吸通常在轻度麻醉下进行。采样部位剃毛并用消*液擦洗（图8-4，A）。将局麻药注入皮下并向下至骨膜，然后用手术刀片做个小切口，以利于针头穿过皮肤（图8-4，B）。始终使用无菌针头和戴手套，但抽吸部位通常不用铺创巾。如果还要做其他需要全身麻醉的手术，则可以安排同时骨髓抽吸以最大程度地减少动物应激。图8-4骨髓抽吸步骤。A，剃毛并用消*液擦洗皮肤，准备好位于大结节远端的肱骨近端前外侧平坦区域（活检部位）。B，用手术刀片做一个小皮肤切口，以利于针头穿过皮肤。C，适度用力将针（中间有管芯针）抽入，逆时针-顺时针旋转用力。D，针牢牢插入骨中后，将针帽（如果有）和管芯针移除。E，装有EDTA的注射器连接到针头上，然后将红色骨髓抽进注射器。F，将抽吸出的含有抗凝剂的骨髓推入培养皿中。然后使用吸管收集用于制作涂片的颗粒。AlloftheabovefromHarveyJW.Bonemarrowaspirationbiopsy.NAVCClinician’sBrief.;February:44-47.为了进入骨髓腔，需要适度用力按顺时针-逆时针方向交替旋转针（管芯针固定在中间）（图8-4，C）。一旦针头牢牢地插入骨中，通常就在骨髓腔内。然后取下管芯针（图8-4，D），将10到20毫升的注射器连接到针头上（图8-4，E）。应快速向后拉动活塞来产生很大的负压。如果未在注射器中添加抗凝剂，一旦注射器中出现几滴骨髓，则释放负压，然后快速取下注射器制作涂片。如果注射器中未出现骨髓，放回管芯针，调整针的位置后再次尝试抽吸。如果未使用抗凝剂，则必须在收集骨髓后的几秒内制作涂片，因为骨髓会迅速凝固。一旦凝固开始，制作的涂片就无法评估，因为在涂片制做过程中，大多数有核细胞都会溶解。我们喜欢将骨髓抽到含有EDTA抗凝剂的注射器中，因为这样可以减少在制作涂片前发生凝固的可能性，并且有时间制作多个涂片，因为后面可能需要特殊染色。另外，使用抗凝剂可以帮助采集到足够的骨髓颗粒，以便准确判读细胞学结果。可以向7mL的EDTA试管中加入0.35mL无菌盐水来制备2.5％或3％EDTA溶液，取决于试管中是干燥EDTA还是溶于水中的EDTA。注射器连接到骨髓抽吸针上之前，使用常规针头将约0.5mL的上述EDTA溶液吸入注射器中。尽管用EDTA收集时无需立即制作涂片，但应在收集后几分钟内制作涂片，因为骨髓细胞（尤其是粒细胞）会迅速变性。将约1mL的骨髓抽吸到装有EDTA的注射器中。混合后，将内容物推入培养皿中。为了准确评估骨髓，用骨髓颗粒（基质和相关细胞）制作涂片十分重要。骨髓颗粒在被血液污染的抽吸物中为白色小颗粒。倾斜培养皿时，颗粒倾向于松散地附着在培养皿的底部。用吸管（图8-4，F）或毛细管收集颗粒用来制作涂片。为了集中颗粒，可以将抽吸物放在载玻片的一端，然后将其垂直放置（图8-5，A）。血液流下时，颗粒往往会粘在玻片上。将第二个载玻片垂直于第一个载玻片放置在颗粒附着区域。骨髓在载玻片之间散开后（图8-5，B），水平拉开两个载玻片。图8-5制备涂片之前集中骨髓颗粒的方法。A，骨髓抽吸物推出到载玻片的一端，然后将其垂直固定。颗粒倾向于粘在载玻片上，同时污染的血液会流走，可以用吸水材料将其吸掉。B，将第二个载玻片垂直放在第一个载玻片的颗粒附着区域。载玻片放在一起不动，让骨髓在它们之间扩散开来；然后快速水平拉开两者并迅速风干。除了使用垂直的载玻片铺开骨髓颗粒外，还可以用22×22毫米，1.5毫米厚的正方形盖玻片（图8-6，A）。这将产生一个盖玻片和一个载玻片涂片。盖玻片比载玻片轻，对颗粒的压力较小。因此，使用盖玻片可以减少有核细胞的破裂。与不使用抗凝剂采集的骨髓相比，用EDTA盐水采集的骨髓更容易发生有核细胞破裂。如果骨髓抽吸物中没有过多血液污染，则可以将抽吸物直接打在载玻片的中间，然后上面再放一个载玻片，然后水平拉开两者，如图8-6,B所示。图8-6制作骨髓抽吸物涂片。A，假设存在足够的颗粒，滴一滴抽吸物到载玻片上，如图与载玻片成直角盖上盖玻片。抽吸物在载玻片和盖玻片之间扩散后，水平拉开盖玻片，然后风干盖玻片和载玻片。对于用EDTA盐水采集的骨髓，建议采用这种方法，因为盖玻片更轻，不太可能因为摩擦力导致细胞裂解。B，假设存在足够的颗粒，滴一滴抽吸物在载玻片的中央，如图将第二个载玻片放在第一个载玻片上。抽吸物在载玻片之间扩散后，快速水平拉开两者，然后快速风干两个玻片。即使刚死的动物，从死亡动物那里采集的骨髓质量通常很差。一旦形成血凝块，抽吸和制作涂片时细胞会溶解。如果要从等待安乐的动物那里采集骨髓，建议先麻醉动物采集骨髓，然后安乐。如果骨髓是尸检时采集的，则应在制作涂片之前加入白蛋白以减少细胞裂解。一种方法建议使用画刷从开放的骨头中收集骨髓，然后将其放在一张石蜡膜上，边上滴一滴22％的牛血清白蛋白溶液。然后将画刷浸入白蛋白溶液中，再制作涂片。另一种方法建议将从尸体那里采集的骨髓与5％牛血清白蛋白溶液（使用生理盐水中制备）混合，然后制作涂片涂片。涂片用罗曼诺夫斯基（Romanowsky）染液（例如Wright，Giemsa或其组合）染色。通常使用改良的Wright染液Diff-Quik也可以得到满意的结果。具体染色时间根据经验决定。较厚的涂片需要更长时间的染色。骨髓涂片染色所需的时间大约是血涂片的两倍。含有骨髓颗粒的涂片将含有肉眼可见的染成蓝色的物质（图8-7）。镜下可见颗粒中包含血细胞前体和基质成分（图8-8）。脂肪会在酒精固定过程中溶解，但在颗粒中会留下大小不等的未染色圆形区域。图8-7两个染色的骨髓涂片。底部涂片中的蓝色物质很少，表明仅存在少量的小骨髓颗粒。顶部涂片中大量的蓝色物质表明存在大量的骨髓颗粒。瑞士-吉姆萨染色。图8-8犬正常骨髓抽吸物涂片。大小不等的圆形区域代表酒精固定过程中溶解的脂肪。图中的大细胞是巨核细胞。瑞士-吉姆萨染色。如果制备了足够的涂片，则应使用普鲁士蓝进行铁染色。与其他物种相比，健康猫的骨髓抽吸物中一般缺乏可染色的铁。如果患有白血病，则可能需要其他特殊染色来区分白血病的类型。骨髓抽吸涂片通常由临床病理学家进行染色和评估。未固定的抽吸涂片不应和福尔马林浸泡的组织样本放在一个包裹中寄出，因为福尔马林蒸气会干扰抽吸涂片中细胞的染色质量。骨髓活检技术如果反复干抽吸，也就是抽不出来骨髓颗粒，则必须进行针芯活检。干抽吸可能是因为技术错误，但也可能是因为骨髓里，例如白血病时，通常在骨髓纤维化时也会发生干抽吸。对于非常幼龄的动物，尽管他们的骨髓一般含有很多细胞，经常会出现干抽吸或采集的样本质量差。与抽吸涂片相比，针芯活检能够更准确的评估骨髓细胞和检查骨髓纤维化、骨髓肉芽肿性疾病或转移性肿瘤。为了诊断血管异常（水肿和出血）和急性炎症（纤维蛋白沉积和局灶性中性粒细胞浸润），也需要进行针芯活检。为了最大程度地了解骨髓情况，我们建议同时进行骨髓抽吸和针芯活检。即使没有计划进行针芯活检，还是建议准备好活检针，以便发生干抽吸时使用。动物准备和针芯活检位置同骨髓抽吸。针芯活检需要使用专门的活检针。医院使用11-13G3-4英寸的Jamshidi活检针。医院使用11-13G3-4英寸长的Jamshidi骨髓活检针（图8-9）。根据动物的种类和大小，可以在髂骨翼，肱骨头或胸骨进行针芯活检。应分开在两个地方进行针芯活检和骨髓抽吸，以确保第一次采样不会破坏下一次采样。从两个不同的部位采样也可以提高发现肿瘤转移的概率。图8-GJamshidi骨髓活检针，内有管芯针，中间导针用来把针内的活检样本推出来，右边是装有福尔马林固定剂的容器。CourtesyofHeatherWamsley.管芯针固定在活检针内，适量压力下交替顺时针-逆时针方向旋转进针（图8-10，A）。一旦针牢固地嵌入骨中，则取出管芯针（图8-10，B）然后采用相同的方式顺时针-逆时针旋转进针（图8-10，C）。可以的话，针应前进1英寸，以获得足够的样本进行评估。针推进到最大深度后，就进行几次度扭转并撤回。用导丝把针内的样本推出，也就是导丝从活检针尖端插入，将样本从手柄末端开口推出（图8-10，D）。因为针的尖端是锥形的，所以从尖端推出样本会挤压样本导致伪像。图8-10骨髓针芯活检步骤。A，管芯针固定在活检针内，适量压力下交替顺时针-逆时针方向旋转进针。B，一旦针头牢固地嵌入骨中，就去掉针帽（如果有）和管芯针。C，采用同样方式顺时针-逆时针旋转进针。可以的话，针应前进一英寸，以获得足够的样本进行评估。D，用导丝把针内的样本推到载玻片上。注意导丝是从针尖端插入，将样本从手柄端推出。E，使用第二个载玻片轻轻滚动样本。随后将用常规的血液染液如瑞士-吉姆萨进行染色。F，在准备好一个或多个滚动涂片后，将样本放入固定剂中。AlloftheabovefromHarveyJW.Bonemarrowcorebiopsy.NAVCClinician’sBrief.;October:32-35.针芯活检时不使用股骨头，因为拔出活检针时，针内样本不会留在针中。由于活检针比抽吸针粗，猫的髂骨翼通常很薄，因此无法像犬那样可以平行于其长轴针芯活检采样。然而，可以在猫髂骨翼做两或三个垂直钻孔活检，一直钻到最背侧面。钻孔得到的样本含有两侧皮质骨，需要多个样本才能进行评估。如果骨髓抽吸时抽不出来东西或涂片质量很差，可以用玻片轻柔地滚动中间的样本（图8-10，E），或用针头滚动玻片上的样本，然后和抽吸涂片一样，采用相同的方式进行染色。这些滚动涂片的质量通常比抽吸涂片质量差。特别是，巨核细胞的数量和可染铁的量通常偏低。制作好一个或多个滚动涂片后，将样本放入固定剂中（图8-10，F），并送检到病理实验室，进行脱钙、包埋、切片、苏木精和伊红（H＆E）染色，可能还需要其他染色，然后由病理学家进行显微镜检查（图8-11）。有时用福尔马林以外的固定剂更好；因此，采样前应咨询病理实验室如何处理样本。未固定的抽吸涂片、滚动涂片或其他脱落细胞涂片不应与福尔马林固定的组织放在一个包裹里邮寄，因为福尔马林蒸气会干扰细胞的染色质量。图8-11犬正常骨髓针芯活检的低倍图像。底部可见粉红色的骨小梁。大小不等的未染色圆形区域代表固定过程中脂肪溶解的位置。图中大细胞是巨核细胞。THEEND预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
